PCR仪反应体系异常状况分析
点击次数：1055 更新时间：2021-12-21
PCR仪扩增可设置一系列不同的退火温度条件（通常12种温度梯度）。因为被扩增的不同的DNA段其适合的退火温度不同，通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增，从而一次性PCR扩增就可以筛选出表达量高的适合退火温度进行有效的扩增。主要用于研究未知DNA退火温度的扩增，这样既节约时间，也节约经费。在不设置梯度的情况下亦可当做普通的PCR用。正真的梯度，是每一排管都有准确的加热控温探头。其他的都是从两头的热传递来设计控温，它多应用于科研、教学机构。
PCR仪的反应体系出现异常状况时的分析：
一、非特异性扩增产物的出现
当扩增产物不止一种时,通常与以下几种情况有关：
1.背景DNA与引物同源性高，可通过在两个引物的内侧序列上再使用另一对扩增产物DNA再次进行PCR扩增；
2.退火温度太低，引物和模板的配对是一个动态过程,分子的热运动使引物与模板结合与解离而达到佳配对位点上，退火温度太低,造成引物与模板的非特异性位点部分配对而解离不下来,这种不正确的配对,进入PCR反应过程就可扩增出非特异性的产物DNA，提高退火的温度将可改善结果；
3.过量的酶,Mg2+,引物和模板DNA可使PCR反应造成混乱,强行扩增出非特异性产物DNA,适当降低这些试剂的量有助于问题的解决。
二、无特异性扩增产物带
1.引物溶液反复冻融或污染了DNA酶类,造成引物降解；
2.模板DNA制备时模板已降解；
3.Taq酶有失活或有杂酶污染；
4.缓冲液条件不当；
5.引物不正确。
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